Actividad antibacteriana del extracto metanólico de Ficus carica sobre bacterias multifarmacorresistentes

Las plantas medicinales en México y en diversas zonas del mundo se utilizan en padecimientos comunes: dolor estomacal, de cabeza, afecciones en la piel, anemia. También se usan en el tratamiento de enfermedades más complejas: diabetes, epilepsia, problemas de fertilidad, cálculos renales, gangrena y cáncer, ya que la medicina moderna carece de tratamientos definitivos que las eliminen o erradiquen (Aguilar et al., 1994; Argueta, 1994).

El descubrimiento de la penicilina por Alexander Fleming (1929) marcó el comienzo de la era de los antibióticos. Después de este hallazgo, en la década de 1940, se presentaron cepas productoras de penicilinasa, esto generó la producción de penicilinas semisintéticas resistentes a esta enzima. Un año más tarde se reportó la presencia de cepas resistentes a la meticilina (MRSA) en el Reino Unido (RU) (Jevons, 1961).

Acorde con esto, la búsqueda de nuevas alternativas para controlar enfermedades ocasionadas por microrganismos farmacorresistentes es imprescindible y de vital importancia en el control de enfermedades ocasionadas por microrganismos farmacorresistentes. Por lo que el estudio se enfocó en evaluar la actividad antibacteriana de F. carica sobre Staphylococcus aureus (ATCC BAA-44), Pseudomonas aeruginosa (ATCC 27853), Escherichia coli (ATCC 25922), Klebsiella pneumoniae (ATCC 700603), Acinobacter baumannii (ATCC 15308) y Enterococcus faecalis (ATCC 29212).

ANTECEDENTES

Los primeros antecedentes sobre el uso de las plantas medicinales parten de la prehistoria, en estudios realizados en Shanidar, Irak, con 60,000 años de antigüedad, en donde se encontraron restos de ocho especies de plantas posiblemente empleadas como medicina (Porter, 1967).

La medicina tradicional desempeña un doble papel: por un lado ser competitiva con la medicina llamada oficial u occidental, en cuanto a la cura y profilaxis. Pero también se convierte en un instrumento valioso, proveedor de medios específicos que guían investigaciones cuyos objetivos son la búsqueda de nuevos medicamentos o terapias no normalizadas (Prieto-González et al., 2004). Actualmente, el consumo de plantas medicinales se asocia al concepto de inocuo y saludable. Sin embargo, se debe tener conocimiento sobre las interacciones con otros medicamentos para evitar riesgos en la salud de quienes lo consumen (Moreale et al., 2012).

Cruzado et al. (2013) recomiendan masticar las hojas de Ficus carica (higuera) si se quiere eliminar las ulceras; el jugo de las hojas contiene una gran cantidad de fibra que beneficia el sistema digestivo, esto se recomienda en personas con sobrepeso, ya que mejora el ritmo digestivo y combate el estreñimiento pues es un laxante natural.

Abarca y Chávez (2018) determinaron que el extracto etanólico de las hojas de F. carica L (higo) presenta actividad antiulcerosa en ratas a una dosis de 800 mg/kg, ya que inhibe 83.01% la ulceración gástrica, en comparación con la ranitidina, que inhibe 73.58%. Además contiene flavonoides, alcaloides, compuestos fenólicos y grupos amina libres detectados por análisis fitoquímico.

Expósito et al. (2017) obtuvieron fracciones de A-F de hojas y órganos aéreos, frutos verdes y maduros de F. carica L, en los cuales detectaron compuestos por tamizaje fitoquímico. La fracción A contiene aminas, taninos, la fracción B contiene triterpenos-esteroideos y las fracciones C y D de hojas y frutos presentan flavonoides, las fracción D y E proantocianidinas-catequinas. En la fracción E sólo se detectaron azúcares reductores y en la F las saponinas. La composición química de los frutos y hojas de F. carica L es similar a las especies de otros países.

Belattar et al. (2021) determinaron el potencial antimicrobiano de esencias crudas de hojas de F. carica (Argelia) contra bacterias patógenas en alimentarios: Staphylococcus aureus, Pseudomonas aeruginosa, Klebsiella pneumonia y Escherichia coli. La actividad bactericida del extracto de hojas (Blanquette) sobre P. aeruginosa fue de 9.25, 8.75 y 8.0 mm a concentraciones de 100, 50 y 25 mg/ml, respectivamente; para E. coli fue de 6.5 mm, a 25 mg/ ml y la actividad antibacteriana resistente se mostraba a 6 mm.

MATERIALES Y MÉTODOS

Obtención de los extractos

Las hojas de Ficus carica fueron recolectadas en el área de Escobedo, Nuevo León, México. La planta se secó a la sombra a temperatura ambiente durante dos semanas. Posteriormente se trituraron y se colocaron en matraces Erlenmeyer, se les agregó metanol, se dejaron reposando alrededor de dos semanas con agitaciones diarias de 15 min con el fin de homogenizar la muestra. Posteriormente se pasaron al rotavapor.

Preparación de las soluciones a evaluar

La solución del extracto metanólico se preparó a 25 mg/ml en un vial, posteriormente se prepararon seis viales más a los que se les agregó 1,500 μl de agua estéril y se realizó una dilución seriada quedando 12.50, 6.25, 3.13, 1.56, 0.78 y 0.39 mg/ ml (Barry et al., 1999; Espinoza, 2020).

Actividad antibacteriana

Con el fin de evaluar el efecto antibacteriano se utilizaron cepas de referencia: Staphylococcus aureus (ATCC BAA-44), Pseudomonas aeruginosa (ATCC 27853), Escherichia coli (ATCC 25922), Klebsiella pneumoniae (ATCC 700603), Acinobacter baumannii (ATCC 15308) y Enterococcus faecalis (ATCC 29212). Cada una por separado se inoculó en un tubo con medio de cultivo Muller Hilton, éstos se incubaron durante 24 h a 36°C (Barry et al., 1999; Espinoza, 2020).

Luego se estandarizó el inóculo de cada cepa con la escala de 0.5 de McFarland (1 x 108 UFC/ml), se tomaron 100 μl del inóculo y se sembró en una placa de agar Müller Hinton mediante la técnica de extendido empleando un asa Digralsky, donde se dispusieron los pocillos alejados de los bordes y con espacio entre cada uno de los orificios, de esta manera se evita que los halos de inhibición se agrupen, se realizaron cinco pocillos sobre el agar, en el centro el control negativo (25 μl agua destilada estéril), los otros cuatro con 25 μl de las diluciones del extracto previamente preparado, las placas se incubaron a 36°C por 24 h y se midieron los halos de inhibición (Barry et al., 1999; Espinoza, 2020).

Concentración mínima inhibitoria

Se utilizó la difusión en placa por pocillo, pero empleando la concentración mínima obtenida en el procedimiento anterior preparando seis diluciones a una concentración de 12.50, 6.25, 3.13, 1.56, 0.78 y 0.39 mg/ml para observar la menor concentración, donde no haya desarrollo de halo de inhibición, considerando como resultado aquél que a la menor concentración no presente desarrollo.

Tamizaje fitoquímico

Se realizó con pruebas químicas según la metodología de Verde et al. (2016). Alcaloides: prueba de Dragendorff; flavonoides: prueba de Shinoda; sesquiterpenlactonas: prueba de Baljet; carbohidratos: prueba de Molish; esteroles y triterpenos: prueba de Liebermann-Buchard y oxhidrilos fenólicos (taninos vegetales): prueba de .

Análisis estadístico

Los valores se expresaron como media ± DE (n=3).

RESULTADOS

Actividad antibacteriana

Primeramente se verificó la resistencia de las bacterias evaluadas ante distintos fármacos por medio de antibiogramas Multibac ID (amplicilina –10 meq–, cefalotina –30 meq–, cefotaxima –30 meq–, ciprofloxacina –5 meq–, clindamicina –30 meq–, dicloxacilina –1 meq–, eritomicina –15 meq–, gentamicina –10 meq–, penicilina –10 U– tetraciclina–30 meq–, sulfametoxasol/trimetroprim –25 meq–, bancomicina –30 meq–), posteriormente se determinó la actividad bactericida utilizando la técnica de difusión en placa por pocillo, observándose operación únicamente en la cepa de S. aureus BAA-44 y en la cepa de E. coli 25922 con el extracto de F. carica resuspendido en metanol a una concentración de 25 mg/ml. El pocillo en el que se mostró la inhibición en ambos casos fue en el marcado con el número 1 en las tres repeticiones realizadas, como se muestra la figura 1.

Figura 1. Actividad bactericida del extracto de F. carica sobre E. coli 25922 (a) y S. aureus BAA-44 (b), en las que se observa el halo de inhibición mostrado solamente en el pocillo número 1 para cada uno.

Al comparar los resultados con las dosis reportadas por Belattar et al. (2021), podemos observar que los rangos iniciales de actividad son de 100 mg/ml, siendo la dosificación mínima de 25 mg/ml, en la cual se obtienen las inhibiciones más pequeñas de 6 mm por pocillo, a diferencia de las encontradas en esta investigación, en las cuales se emplearon dosis menores a 25 mg/ ml con inhibiciones de 2-4 mm. Otro hecho a considerar de las diferencias en el resultado es la posible distribución de la cantidad de muestra depositada en los pocillos: 100 μl, siendo ésta la que mostraba mayor inhibición.

Por último se realizaron pruebas fitoquímicas de F. carica para observar qué componentes se encuentran presentes, se observó la presencia de metabolitos secundarios: esteroles, terpenos, flavonoides y carbohidratos, se ha reportado la aparición de terpenos, flavonoides, azúcares reductores y aminas en la investigación de Expósito et al. (2017), a éstos se les atribuyen varias funciones tanto medicinales como contra bacterias como S. aureus y E. coli.

Aguilar, A., Camacho, J.R., Chino, S., et al. (1994). Plantas medicinales del herbario, Instituto Mexicano del Seguro Social, México.

Jain, A., Katewa, S.S., Galav, P.K., et al. (2005). Medicinal plant diversity of Sitamata wildlife sanctuary, Rajasthan, India, Journal of Ethnopharmacology, 102(2), 143-157.