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<\/a><\/p>\n <\/p>\n
Expresi\u00f3n de genes<\/b><\/p>\n
Se analiz\u00f3 la influencia de los extractos o compuestos a una concentraci\u00f3n equivalente a 75% de la CMB en la expresi\u00f3n de tres genes de virulencia y el factor rpoS en las cepas, encontr\u00e1ndose que el efecto fue cepa y com- puesto dependiente y no siguieron un patr\u00f3n consistente en las cepas EHEC O157:H7 y EAEC O104:H4. Solamente en el caso de la cepa EAEC042 se observo\u00a0un patr\u00f3n constante en el que se disminu\u00eda la expresi\u00f3n de los genes pic y rpoS, y un incremento del regulador maestro aggR (tabla IV) en la mayor\u00eda de los tratamientos al comparase con el control. La expresi\u00f3n del gen Stx2 en EHEC O157:H7 y EAEC O104:H4, disminuy\u00f3 de 34% a 96%, al exponerse a los compuestos o extractos analizados. Sin embargo, la brasilina increment\u00f3 su expresi\u00f3n (entre 30 y 40%) en las dos cepas, en tanto que el carvacrol s\u00f3lo lo hizo en la cepa EAEC O104:H4.<\/p>\n
La mayor\u00eda de los extractos incrementaron la expresi\u00f3n del regulador maestro aggR en EAEC O104:H4, con excepci\u00f3n de or\u00e9gano y citral que redujeron su expresi\u00f3n entre 40 y 60%. En el caso de la cepa EAEC 042, este gen se sobreexpres\u00f3 de 10 a 550% con los extractos o compuestos agregados cuando se compar\u00f3 con el control. El gen pic, presente en las cepas EAEC, se sobreexpres\u00f3 entre 20 y 110% con todos los extractos o compuestos agregados en EAEC O104:H4, con excepci\u00f3n de or\u00e9gano y citral que incrementaron la expresi\u00f3n del gen entre 30 y 60%. Por el otro lado, la expresi\u00f3n del gen pic se redujo entre 50 a 97% al agregar los tratamientos a la cepa EAEC 042.<\/p>\n
La expresi\u00f3n de rpoS se increment\u00f3 en EHEC O157:H7 con or\u00e9gano, carvacrol y rifaximina, pero se redujo por Hb y citral. La brasilina increment\u00f3 la expresi\u00f3n de este gen en EAEC O104:H4. De manera interesante, todos los extractos y compuestos redujeron la expresi\u00f3n (20 a 60%) de EAEC 042 cuando se compar\u00f3 con el control (tabla IV).<\/p>\n
DISCUSI\u00d3N<\/b><\/p>\n
Numerosas plantas comestibles y sus compuestos purificados han mostrado tener actividad antimicrobiana que puede deberse a mecanismos diversos, como la ruptura de la membrana celular, incremento en la permeabilidad membranal, disminuci\u00f3n del pH intracelular, hiperpolarizai\u00f3n de la membrana celular, disminuci\u00f3n del nivel intracelular de ATP, etc\u00e9tera (S\u00e1nchez et al., <\/i>2010). Se ha determinado que el carvacrol tiene la capacidad de unirse al ADN (Nafisi et al.<\/i>, 2004), sugiriendo que la formaci\u00f3n de complejos de ADN puede ser un mecanismo para las interacciones antimicrobiano-ADN.<\/p>\n
En este estudio, los compuestos aislados carvacrol y brasilina demostraron tener una mayor actividad bactericida en comparaci\u00f3n con los extractos completos de or\u00e9gano y Hb, respectivamente. Estas observaciones son consistentes con estudios previos que han se\u00f1alado que el carvacrol presenta mayor efecto bactericida cuando se compara con extractos de or\u00e9gano. Se piensa que la actividad antimicrobiana es debida a la interacci\u00f3n del compuesto con la bicapa lip\u00eddica de la membrana celular, provocando p\u00e9rdida de la integridad y como consecuencia fuga del material celular (Nostro et al.<\/i>, 2007).<\/p>\n
Se ha reportado actividad antimicrobiana del citral contra E. coli <\/i>(Somolinos et al.<\/i>, 2009), y en este trabajo tambi\u00e9n se encontr\u00f3 que posee actividad contra cepas\u00a0pat\u00f3genas de E. coli. <\/i>En este estudio tambi\u00e9n confirmamos la actividad antimicrobiana de la rifaximina contra E. coli<\/i>, tal como hab\u00eda sido reportado previamente (Hopkins et al., <\/i>2014).<\/p>\n
En este estudio, casi todos los tratamientos redujeron la movilidad tipo swarming <\/i>en las cepas de E. coli <\/i>analizadas, sin embargo, contrario a nuestras expectativas, el carvacrol la promovi\u00f3 en EHEC O157:H7 y EAEC 042, pero no en EAEC 0104:H4. Entre las posibles causas de estos resultados est\u00e1n variaciones fisiol\u00f3gicas y morfol\u00f3gicas de los aislados y a la vez la acci\u00f3n de los diferentes antimicrobianos naturales. Estudios previos han se\u00f1alado que el carvacrol puede reducir la movilidad de Salmonella Typhimurium <\/i>(Van Alphen et al., <\/i>2012). Adem\u00e1s, est\u00e1 establecido que las c\u00e9lulas nadadoras tienen gran actividad metab\u00f3lica y, como consecuencia, pudieran desplegar un fenotipo resistente contra antimicrobianos (Lai et al.<\/i>, 2009). M\u00e1s a\u00fan, se ha establecido que B. cereus <\/i>tiene la capacidad de adaptarse a concentraciones subletales de carvacrol debido a variaciones en sus \u00e1cidos grasos, disminuyendo la fluidez de la membrana (Ultee et al.<\/i>, 2000). Se ha reportado que el citral es capaz de causar da\u00f1os subletales a c\u00e9lulas de E. coli <\/i>(Somolinos et al.<\/i>, 2009); sin embargo, las c\u00e9lulas se pueden recobrar mediante la s\u00edntesis de l\u00edpidos, requiriendo para esto grandes cantidades de energ\u00eda que, en un momento dado, pudieran afectar el desarrollo de c\u00e9lulas h\u00edper flageladas, y como consecuencia, reducir la movilidad tipo swarming<\/i>.<\/p>\n
El efecto observado de los compuestos utilizados en la producci\u00f3n de biopel\u00edcula vari\u00f3 grandemente entre las cepas y los compuestos probados. Villegas et al. <\/i>(2015) han reportado que la rifaximina a concentraciones de 0.032mg\/ml y 32 mg\/ml disminuyeron la formaci\u00f3n de biopel\u00edcula en algunas cepas STEC. En nuestro estudio, la concentraci\u00f3n m\u00e1s baja de rifaximina que utilizamos (25% de la CMB) fue capaz de provocar una reducci\u00f3n de la biopel\u00edcula en la cepa EAEC042. Sin embargo, a 75% de la CMB, contrario a lo esperado, promovi\u00f3 su desarrollo en EHEC O157:H7 y EAEC O104:H4, dando muestras de las diferencias entre serotipos.<\/p>\n
A bajas concentraciones (25% de la CMB) de or\u00e9gano, carvacrol, brasilina y citral se produjo un incremento en la formaci\u00f3n de biopel\u00edcula en EHEC O157:H7 y EAEC O104:H4. Previamente se ha reportado que a concentraciones subletales de antibi\u00f3ticos se puede inducir la formaci\u00f3n de biopel\u00edcula en algunas bacterias. Esto se debe a una respuesta de protecci\u00f3n que inducen alteraciones a nivel del monofosfato c\u00edclico de diguanosina (Hoffman et al.<\/i>, 2005).<\/p>\n
Es de suma importancia indicar que la mayor\u00eda de los compuestos analizados en este estudio disminuyeron la expresi\u00f3n del gen Stx2 en EHEC O157:H7 y EAEC O104:H4. Estos compuestos se suman a la rifaximina que disminuye la inducci\u00f3n de Stx2 y ha sido usada para el tratamiento de brotes de enfermedad (Bielaszewska et al. <\/i>2012).<\/p>\n
Los productos codificados por el gen rpoS pueden funcionar como represores de la movilidad tipo swarming en Serratia <\/i>sp. (Wilf y Salmond, 2012), por lo que en este trabajo examinamos si exist\u00eda una relaci\u00f3n entre la expresi\u00f3n de rpoS, movilidad tipo swarming <\/i>y formaci\u00f3n de biopel\u00edcula por efecto de los compuestos utilizados. Para el caso de EHECO157:H7, la expresi\u00f3n de rpoS se increment\u00f3 por la mayor\u00eda de los compuestos analizados, con excepci\u00f3n de Hb y citral, sin embargo, la movilidad se redujo con la mayor\u00eda de los compuestos, menos con carvacrol; por lo que el incremento en la expresi\u00f3n de rpoS no se correlacion\u00f3 con la disminuci\u00f3n de swarming<\/i>. De manera similar, la formaci\u00f3n de biopel\u00edcula se redujo con Hb, brasilina y citral, pero increment\u00f3 con rifaximina, por lo que no existi\u00f3 una relaci\u00f3n entre los compuestos analizados, la expresi\u00f3n de rpoS y la formaci\u00f3n de biopel\u00edcula.<\/p>\n
Cuando estudiamos la cepa EAEC O104:H4, la expresi\u00f3n de rpoS se increment\u00f3 por or\u00e9gano, carvacrol y rifaximina, pero se redujo al a\u00f1adir Hb y brasilina. M\u00e1s a\u00fan, la movilidad tipo swarming <\/i>se redujo en todos los tratamientos, pero la producci\u00f3n de biopel\u00edcula s\u00f3lo se disminuy\u00f3 con Hb y se increment\u00f3 con rifaximina. La expresi\u00f3n de rpoS se redujo con todos los tratamientos en EAEC 042, en tanto que la biopel\u00edcula se redujo o no se afect\u00f3 y la movilidad tipo swarming <\/i>disminuy\u00f3 con todos los tratamientos menos carvacrol. Con base en lo anterior, no existi\u00f3 una relaci\u00f3n clara entre la expresi\u00f3n del gen rpoS y los par\u00e1metros analizados en este estudio en las cepas EAEC analizadas.<\/p>\n
Una observaci\u00f3n interesante en este estudio fue que en EAEC O104:H4 los niveles de expresi\u00f3n de pic y rpoS fueron variables, mientras que en la cepa EAEC 042, la expresi\u00f3n de ambos genes fue suprimida al agregar los compuestos o extractos analizados. Esta observaci\u00f3n indica que, aunque ambas son cepas pertenecientes al patotipo enteroagregativo (EAEC), existen diferencias en su regulaci\u00f3n g\u00e9nica, sugiriendo que la respuesta mostrada a los antimicrobianos, adem\u00e1s de ser dependientes del compuesto, lo es de las variaciones entre las cepas. Adicionalmente, se demostr\u00f3 que existen grandes variaciones en la expresi\u00f3n de genes cuando se utilizaron extractos crudos y sus compuestos mayoritarios. Estas diferencias pueden deberse a la presencia de compuestos no identificados en los extractos crudos que pueden modificar su actividad (\u00c1vila-Sosa et al.<\/i>, 2010).<\/p>\n
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*Universidad Aut\u00f3noma de Nuevo Le\u00f3n<\/p>\n
Contacto: norma@microbiosymas.com<\/p>\n
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REFERENCIAS<\/b><\/p>\n
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Recibido: 8 de septiembre de 2017 <\/i><\/p>\n
Aceptado: 13 de octubre de 2017<\/i><\/p>\n","protected":false},"excerpt":{"rendered":"
Alam Garc\u00eda-Heredia*, Santos Garc\u00eda*, \u00c1ngel Merino-Mascorro*, Norma Heredia* CIENCIA UANL \/ A\u00d1O 21, No. 87 enero-febrero 2018 RESUMEN Varios grupos de Escherichia coli pueden causar enfermedades con alta mortalidad en el humano, facilitando esta capacidad por mecanismos bacterianos que permiten su colonizaci\u00f3n y persistencia. Se han desarrollado tratamientos para su control, sin embargo, debido a su eficacia incompleta y a […]<\/p>\n","protected":false},"author":4,"featured_media":0,"comment_status":"closed","ping_status":"closed","sticky":false,"template":"","format":"standard","meta":{"_monsterinsights_skip_tracking":false,"_monsterinsights_sitenote_active":false,"_monsterinsights_sitenote_note":"","_monsterinsights_sitenote_category":0,"footnotes":""},"categories":[27],"tags":[],"class_list":["post-7572","post","type-post","status-publish","format-standard","hentry","category-investigacion"],"_links":{"self":[{"href":"https:\/\/cienciauanl.uanl.mx\/index.php?rest_route=\/wp\/v2\/posts\/7572","targetHints":{"allow":["GET"]}}],"collection":[{"href":"https:\/\/cienciauanl.uanl.mx\/index.php?rest_route=\/wp\/v2\/posts"}],"about":[{"href":"https:\/\/cienciauanl.uanl.mx\/index.php?rest_route=\/wp\/v2\/types\/post"}],"author":[{"embeddable":true,"href":"https:\/\/cienciauanl.uanl.mx\/index.php?rest_route=\/wp\/v2\/users\/4"}],"replies":[{"embeddable":true,"href":"https:\/\/cienciauanl.uanl.mx\/index.php?rest_route=%2Fwp%2Fv2%2Fcomments&post=7572"}],"version-history":[{"count":1,"href":"https:\/\/cienciauanl.uanl.mx\/index.php?rest_route=\/wp\/v2\/posts\/7572\/revisions"}],"predecessor-version":[{"id":7577,"href":"https:\/\/cienciauanl.uanl.mx\/index.php?rest_route=\/wp\/v2\/posts\/7572\/revisions\/7577"}],"wp:attachment":[{"href":"https:\/\/cienciauanl.uanl.mx\/index.php?rest_route=%2Fwp%2Fv2%2Fmedia&parent=7572"}],"wp:term":[{"taxonomy":"category","embeddable":true,"href":"https:\/\/cienciauanl.uanl.mx\/index.php?rest_route=%2Fwp%2Fv2%2Fcategories&post=7572"},{"taxonomy":"post_tag","embeddable":true,"href":"https:\/\/cienciauanl.uanl.mx\/index.php?rest_route=%2Fwp%2Fv2%2Ftags&post=7572"}],"curies":[{"name":"wp","href":"https:\/\/api.w.org\/{rel}","templated":true}]}}
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