{"id":3135,"date":"2015-01-22T11:59:21","date_gmt":"2015-01-22T17:59:21","guid":{"rendered":"http:\/\/cienciauanl.uanl.mx\/?p=3135"},"modified":"2015-02-16T10:09:07","modified_gmt":"2015-02-16T16:09:07","slug":"proteoma-y-vias-de-senalizacion-inducidas-por-aas-en-celulas-que-expresan-el-vhc","status":"publish","type":"post","link":"https:\/\/cienciauanl.uanl.mx\/?p=3135","title":{"rendered":"Proteoma y v\u00edas de se\u00f1alizaci\u00f3n inducidas por AAS en c\u00e9lulas que expresan el VHC"},"content":{"rendered":"

\"proteomainvest\"<\/a><\/p>\n

ADRIANA S\u00c1NCHEZ GARC\u00cdA*, HERMINIA G. MART\u00cdNEZ RODR\u00cdGUEZ*, CLARA P. R\u00cdOS IBARRA*,
\nANA R. RINC\u00d3N S\u00c1NCHEZ**, ANA M. RIVAS ESTILLA*<\/p>\n

CIENCIA UANL \/ A\u00d1O 18, No. 71, ENERO-FEBRERO 2015<\/a><\/p>\n

Art\u00edculo en PDF<\/a><\/p>\n

\"premioinvestigacion2014\"<\/a><\/p>\n

 <\/p>\n

La infecci\u00f3n cr\u00f3nica por el virus de\u00a0la hepatitis C (VHC) puede desencadenar\u00a0enfermedades hep\u00e1ticas\u00a0graves como cirrosis y carcinoma\u00a0hepatocelular; afecta a 3% de la poblaci\u00f3n\u00a0mundial y se considera un\u00a0problema grave de salud p\u00fablica. (1-4)<\/p>\n

El VHC pertenece a la familia Flaviviridae, con genoma\u00a0de RNA de cadena sencilla y polaridad positiva.\u00a0El tratamiento est\u00e1ndar, hasta 2011, consist\u00eda en\u00a0la combinaci\u00f3n de interfer\u00f3n \u03b1 pegilado y ribavirina.\u00a0Recientemente se ha sugerido el uso de inhibidores\u00a0de la proteasa viral (boceprevir o telaprevir); sin\u00a0embargo, no en todos los pacientes tratados se consigue\u00a0una respuesta virol\u00f3gica sostenida. (5)<\/p>\n

En la actualidad, los modelos de replic\u00f3n gen\u00f3mico\u00a0y subgen\u00f3mico han hecho posible el desarrollo\u00a0de agentes que bloquean espec\u00edficamente la replicaci\u00f3n\u00a0viral. (6,7) A este respecto, Trujillo et al., con un\u00a0sistema de replic\u00f3n subgen\u00f3mico tratado con \u00e1cido\u00a0acetilsalic\u00edlico (AAS), reportaron la disminuci\u00f3n del\u00a0RNA y prote\u00ednas del VHC; (8) sin embargo, el mecanismo\u00a0implicado est\u00e1 pobremente definido. Mediante\u00a0el an\u00e1lisis exhaustivo de perfiles proteicos de expresi\u00f3n\u00a0diferencial entre muestras normales, patol\u00f3gicas\u00a0o expuestas a un tratamiento obtenidos con electroforesis\u00a0bidimensional (2-DE) o chips de prote\u00ednas,\u00a0la prote\u00f3mica provee informaci\u00f3n de biomarcadores\u00a0y blancos asociados a enfermedades. (9,10)<\/p>\n

Con base en lo anterior, examinamos la expresi\u00f3n\u00a0diferencial de prote\u00ednas de la l\u00ednea celular Huh7,\u00a0que expresa las prote\u00ednas no estructurales del VHC\u00a0(Huh7 replic\u00f3n-VHC) y la l\u00ednea Huh7 parental expuestas\u00a0a AAS, a fin de elucidar el mecanismo relacionado\u00a0con la disminuci\u00f3n de la expresi\u00f3n del VHC.\u00a0Observamos que la presencia de AAS induce un patr\u00f3n\u00a0diferencial de prote\u00ednas en c\u00e9lulas tratadas, y\u00a0promueve la activaci\u00f3n de prote\u00ednas relacionadas con\u00a0progresi\u00f3n celular, proliferaci\u00f3n, inhibici\u00f3n de la\u00a0apoptosis y crecimiento, al mismo tiempo que disminuye\u00a0la expresi\u00f3n del VHC.<\/p>\n

OBJETIVO<\/strong><\/p>\n

Identificar perfiles diferenciales de prote\u00edna en c\u00e9lulas\u00a0Huh7, que expresan prote\u00ednas no estructurales\u00a0del VHC y en c\u00e9lulas Huh7 parental expuestas a AAS,\u00a0para elucidar el mecanismo involucrado en la disminuci\u00f3n\u00a0de la replicaci\u00f3n del VHC mediada por AAS.<\/p>\n

MATERIAL Y M\u00c9TODOS<\/strong><\/p>\n

Cultivo celular y tratamiento con AAS 4 mM<\/p>\n

Se utiliz\u00f3 la l\u00ednea celular de hepatocarcinoma Huh7,\u00a0que expresa las prote\u00ednas no estructurales del VHC\u00a0genotipo 1b (replic\u00f3n subgen\u00f3mico) y la l\u00ednea celular\u00a0Huh7 parental (sin replic\u00f3n). Las c\u00e9lulas se mantuvieron\u00a0en medio ADMEM (GIBCO-BRL, suplementado\u00a0con 2% de suero bovino fetal\u00a0(GIBCO-BRL), 1% de amino\u00e1cidos no esenciales,\u00a0100 U de penicilina G y 100 \u03bcg\/mL de estreptomicina\u00a0por mL a 37\u00b0C y 5% de CO2. Para el tratamiento,\u00a0las c\u00e9lulas se sembraron un d\u00eda antes y se trataron\u00a0con 4 mM de AAS (Sigma-Aldrich)(0-72 h).<\/p>\n

Extracci\u00f3n de prote\u00edna total<\/p>\n

Las c\u00e9lulas se trataron con 4 mM de AAS y se incubaron\u00a0por 0 a 72 h. A cada tiempo, las c\u00e9lulas se\u00a0cosecharon y se extrajeron las prote\u00ednas totales con\u00a0el kit MicroRotoforTM Lysis (Bio-Rad), seguido de la\u00a0purificaci\u00f3n de prote\u00ednas con el estuche ReadyPrep\u00a02D Cleanup (Bio-Rad). La cuantificaci\u00f3n se realiz\u00f3\u00a0mediante Bradford.<\/p>\n

Electroforesis bidimensional y an\u00e1lisis prote\u00f3mico<\/p>\n

Para la electroforesis 2D, 120 \u03bcg de prote\u00edna se aplicaron\u00a0en tiras IPG (Bio-Rad) de 17 cm pH 3-10. La\u00a0separaci\u00f3n en primera dimensi\u00f3n se hizo en el equipo\u00a0Protean IEF Cell (Bio-Rad), con un gradiente de\u00a010,000 V en 2.5h y 40,000 V\/h. Las tiras IPG se\u00a0equilibraron despu\u00e9s en buffer (urea 6 M, SDS 2%,\u00a0Tris-HCl 50 mM, pH 8.8, glicerol 30%), con DTT\u00a0a 0.5% y buffer con iodoacetamida a 4.5%. La separaci\u00f3n\u00a0en segunda dimensi\u00f3n se realiz\u00f3 con el sistema\u00a0Protean II XI Cell (Bio-Rad), en poliacrilamida\u00a0a 12%, 150 V y 4\u00b0C. Se adicion\u00f3 un marcador de\u00a0peso molecular (PM) y punto isoel\u00e9ctrico (pI) de siete\u00a0prote\u00ednas conocidas, para establecer puntos de referencia\u00a0en el an\u00e1lisis subsecuente. Todos los geles se prepararon\u00a0por triplicado.<\/p>\n

An\u00e1lisis prote\u00f3mico e identificaci\u00f3n de las prote\u00ednas\u00a0sobreexpresadas<\/p>\n

Las prote\u00ednas se revelaron con tinci\u00f3n de nitrato de\u00a0plata (Silver Stain Plus Kit, Bio-Rad). Los perfiles de\u00a0prote\u00ednas obtenidos en geles se digitalizaron en el\u00a0densit\u00f3metro GS-800 (Bio-Rad), y el an\u00e1lisis\u00a0bidimensional se hizo con el software PDQuest\u00a0V8.0.1 (Bio-Rad). Se identificaron diferencias en las\u00a0prote\u00ednas expresadas de acuerdo con Gasteiger et al., (11) en las que una herramienta bioinform\u00e1tica de prote\u00ednas\u00a0calcula el PM y pI estimado de un dato espec\u00edfico\u00a0de la base de datos Swis-Prot\/TrEMBL, o una\u00a0secuencia espec\u00edfica de amino\u00e1cidos.<\/p>\n

Brevemente, las prote\u00ednas fueron identificadas y\u00a0elucidadas bioinform\u00e1ticamente por su pI y PM con\u00a0el programa TagIdent (Uniprot Consortium), (http:\/\u00a0\/www.expasy. org\/tools\/pi_tools.html). TagIdent realiza\u00a0la identificaci\u00f3n de prote\u00ednas al comparar etiquetas\u00a0de secuencia contra prote\u00ednas de la base de\u00a0datos Swiss-Prot de una o m\u00e1s especies de organismos\u00a0dentro de un intervalo de pI y PM. Adem\u00e1s, se\u00a0realiz\u00f3 un an\u00e1lisis de componente principal (ACP)\u00a0para determinar las prote\u00ednas de mayor relevancia en\u00a0las condiciones probadas para determinar los coeficientes\u00a0factoriales (nivel de correlaci\u00f3n y componente\u00a0principal) con el programa Unscrambler 9.8. Los\u00a0datos reportados son los promedios \u00b1 desviaci\u00f3n est\u00e1ndar\u00a0de tres experimentos independientes. El an\u00e1lisis\u00a0estad\u00edstico incluy\u00f3 la prueba de t de Student\u00a0(p<0.05).<\/p>\n

RESULTADOS<\/strong><\/p>\n

Colectamos el proteoma celular despu\u00e9s de cada periodo\u00a0de incubaci\u00f3n (0-72h), con el tratamiento de\u00a0AAS 4 mM, enfoc\u00e1ndonos en la m\u00e1xima inhibici\u00f3n\u00a0de VHC en las c\u00e9lulas Huh7 replic\u00f3n (48 y 72h\u00a0postratamiento) (*p<0.05). (8) Los patrones bidimensionales\u00a0diferenciales mostraron entre 674 y 1416\u00a0prote\u00ednas por gel, con la mayor\u00eda localizada en la regi\u00f3n\u00a0de alto PM y de pI ligeramente \u00e1cido, distribuidas\u00a0en un rango de 10 a 140 kDa (figura 1A y 1B). El mismo est\u00e1ndar interno se us\u00f3 en todas las muestras. El promedio del n\u00famero de manchas que representan prote\u00ednas individuales o prote\u00ednas con migraci\u00f3n similar obtenidas fue de 923 y 816 para c\u00e9lulas Huh7 parental y Huh7 replic\u00f3n, respectivamente. Luego de comparar y normalizar a condiciones basales las manchas de prote\u00edna, se identificaron numerosas manchas expresadas diferencialmente (sub y sobreexpresadas) entre ambas l\u00edneas celulares tratadas con AAS.<\/p>\n

Detectamos 37 manchas de prote\u00edna diferencialmente\u00a0expresadas de manera cualitativa, y 343 manchas\u00a0de prote\u00edna expresadas diferencialmente de manera\u00a0cuantitativa. La comparaci\u00f3n de los geles de\u00a0ambas l\u00edneas celulares (parental y replic\u00f3n) mostr\u00f3\u00a024 manchas de prote\u00edna sobreexpresadas significativamente\u00a0en las c\u00e9lulas replic\u00f3n (3 veces, t-test,\u00a0p<0.05).<\/p>\n

En la figura 1 se muestran perfiles de expresi\u00f3n\u00a0proteica representativos de ambas l\u00edneas celulares en\u00a0ausencia y presencia de AAS 4 mM a diferentes tiempos\u00a0de exposici\u00f3n. Encontramos prote\u00ednas diferencialmente\u00a0expresadas, tanto cualitativa como cuantitativamente\u00a0a 24, 48 y 72 h. A 24 y 48 h, se observa\u00a0el mayor n\u00famero de prote\u00ednas diferencialmente expresadas\u00a0con significancia estad\u00edstica (tabla I). Los\u00a0resultados se evaluaron mediante ACP para distinguir\u00a0prote\u00ednas correlacionadas en el contexto del\u00a0modelo de estudio, y reducir y discriminar entre el\u00a0gran n\u00famero de variables aqu\u00e9llas con mayor trascendencia. La varianza explicada (EV = 1\/n \u2022Xt<\/sup>X)\u00a0con dos componentes principales (CP1 y CP2) fue la\u00a0siguiente: a las 24h observamos una EV de 86 y 12%;\u00a0a las 48 h la EV fue de 57 y 32%, y a las 72h fue de\u00a064 y 20% para las c\u00e9lulas tratadas o no con AAS,\u00a0respectivamente.<\/p>\n

\"Fig.<\/a>

Fig. 1. Separaci\u00f3n bidimensional de prote\u00ednas de c\u00e9lulas Huh7 parental y Huh7 replic\u00f3n-VHC obtenida luego de la 2-DE. Las prote\u00ednas se separaron en tiras IPG con gradiente de pH lineal 3-10, con 120 \u03bcg de prote\u00edna, seguida de SDS-PAGE a 12% (20 cm x 20 cm 1.5 mm). Los geles se ti\u00f1eron con nitrato de plata (Bio-Rad). A) An\u00e1lisis bidimensional del extracto de prote\u00edna de c\u00e9lulas Huh7 parental tratadas con AAS 4 mM a diferentes tiempos. B) An\u00e1lisis bidimensional de la prote\u00edna extra\u00edda de c\u00e9lulas Huh7 replic\u00f3n-VHC tratadas con AAS 4 mM a diferentes tiempos.<\/p><\/div>\n

 <\/p>\n

En ambos tipos celulares, se analizaron las diferencias\u00a0en la expresi\u00f3n proteica en respuesta al tratamiento\u00a0en las 1416 prote\u00ednas detectadas con una\u00a0prueba de t independiente. Con inter\u00e9s, observamos\u00a0que las c\u00e9lulas parentales tuvieron una respuesta diferente\u00a0a la exposici\u00f3n a AAS, puesto que el total y la\u00a0suma de prote\u00ednas diferencialmente expresadas a los\u00a0tres tiempos fue mayor que las prote\u00ednas diferencialmente\u00a0expresadas en las c\u00e9lulas replic\u00f3n (167 vs. 57\u00a0prote\u00ednas, respectivamente) (tabla I). Por otra parte,\u00a0las c\u00e9lulas replic\u00f3n tienen menos prote\u00ednas diferencialmente\u00a0expresadas a 72h postratamiento (tabla I).<\/p>\n

\"Tabla<\/a>

Tabla I. Prote\u00ednas diferencialmente expresadas encontradas en la l\u00ednea celular Huh7 parental y replic\u00f3n luego del tratamiento con AAS. DIF* Prote\u00ednas diferencialmente expresadas. En par\u00e9ntesis se muestra el n\u00famero de prote\u00ednas estad\u00edsticamente significativas con t-test entre los grupos con y sin AAS al mismo tiempo de evaluaci\u00f3n. AAS= 4mM<\/p><\/div>\n

El an\u00e1lisis prote\u00f3mico report\u00f3 289 prote\u00ednas diferencialmente\u00a0expresadas entre las c\u00e9lulas replic\u00f3n-VHC, en presencia o ausencia de AAS. Con respecto\u00a0a la identificaci\u00f3n de prote\u00ednas involucradas en\u00a0disminuci\u00f3n mediada por AAS de la replicaci\u00f3n del\u00a0VHC-1b, encontramos que la mayor\u00eda de las prote\u00ednas\u00a0sobreexpresadas a las 24h del tratamiento con\u00a0AAS se relaciona con proliferaci\u00f3n celular, mostrando\u00a0la expresi\u00f3n de las prote\u00ednas MTMR6, FAM22,\u00a0HDGF y HCF-1. Luego de 48 h de exposici\u00f3n a\u00a0AAS, observamos la sobreexpresi\u00f3n de angiostatina,\u00a0PI4KA y STAT-1 y, finalmente, a las 72h postratamiento\u00a0se observ\u00f3 sobreexpresi\u00f3n de adenilsuccinato sintasa\u00a0(prote\u00edna relacionada con la s\u00edntesis de purinas en h\u00edgado),\u00a02\u2019,3\u2019-di-deoxiadenosina, ubiquitin-protein-ligasa\u00a0E6A, adenilsuccinato liasa y nibrina (tabla II).<\/p>\n

\"Tabla<\/a>

Tabla II. Prote\u00ednas diferencialmente expresadas encontradas en la l\u00ednea celular Huh7 parental y replic\u00f3n luego del tratamiento con AAS. DIF* Prote\u00ednas diferencialmente expresadas. En par\u00e9ntesis se muestra el n\u00famero de prote\u00ednas estad\u00edsticamente sigificativas con t-test entre los grupos con y sin AAS al mismo tiempo de evaluaci\u00f3n. AAS= 4mM.<\/p><\/div>\n

DISCUSI\u00d3N<\/strong><\/p>\n

A pesar de los extensos estudios de los\u00a0antiinflamatorios no establecidos (AINEs), poco se\u00a0sabe de sus efectos en las infecciones virales. Nuestro\u00a0grupo demostr\u00f3 previamente que el efecto antiviral\u00a0de AAS es parcialmente dependiente de la inhibici\u00f3n\u00a0de la actividad de cicleoxigenasa-2 (COX-2) y\u00a0la s\u00edntesis de prostaglandinas en el sistema celular de\u00a0replic\u00f3n subgen\u00f3mico del VHC 1b.8 Con base en el\u00a0hallazgo de Trujillo et al., en este trabajo abordamos\u00a0la b\u00fasqueda de efectores que pudieran intervenir en\u00a0el resultado observado para obtener m\u00e1s informaci\u00f3n\u00a0del mecanismo antiviral, aplicando t\u00e9cnicas\u00a0prote\u00f3micas y herramientas bioinform\u00e1ticas para\u00a0analizar globalmente el perfil de expresi\u00f3n proteica\u00a0de la l\u00ednea celular humana de hepatocarcinoma Huh7,\u00a0en presencia y ausencia de tratamiento con AAS. Varios de nuestros hallazgos concordaron con datosreportados en que se emple\u00f3 un sistema de cultivo celular con el replic\u00f3n subgen\u00f3mico\/gen\u00f3mico del VHC. (12-14) Estas diferencias de expresi\u00f3n entre las condiciones estudiadas coinciden con reportes previos en la expresi\u00f3n diferencial de las c\u00e9lulas Huh7 y las c\u00e9lulas que expresan las prote\u00ednas no estructurales del VHC; (15) sin embargo, adicionalmente, se encontraron diferentes patrones de prote\u00edna en los hepatocitos que expresaban las prote\u00ednas del VHC y c\u00e9lulas tratadas con AAS.<\/p>\n

La infecci\u00f3n por el VHC afecta el ciclo celular y\u00a0distintas v\u00edas de se\u00f1alizaci\u00f3n, y contribuye a la\u00a0patog\u00e9nesis viral. Con base en lo anterior, se podr\u00edan\u00a0explicar los resultados que obtuvimos al comparar\u00a0las prote\u00ednas diferencialmente expresadas de las c\u00e9lulas\u00a0Huh7 parental y Huh7 replic\u00f3n, en respuesta a\u00a0la exposici\u00f3n de AAS (tabla I). El tratamiento con\u00a0AAS afecta la expresi\u00f3n proteica de la c\u00e9lula hospedera;\u00a0pero, al mismo tiempo, el perfil de prote\u00ednas es\u00a0afectado por la presencia de las prote\u00ednas virales.\u00a0Se encontr\u00f3 que el VHC promueve la activaci\u00f3n\u00a0de prote\u00ednas relacionadas en la proliferaci\u00f3n y progresi\u00f3n\u00a0del ciclo celular. MTMR6, HDGF y HCF-\u00a01 se han asociado previamente con la inhibici\u00f3n de\u00a0la apoptosis, la uni\u00f3n a oncoprote\u00ednas, el est\u00edmulo\u00a0del crecimiento celular y la progresi\u00f3n del ciclo celular,\u00a0respectivamente. Luego de 48 h postratamiento\u00a0con AAS, el virus contin\u00faa promoviendo la proliferaci\u00f3n\u00a0y la progresi\u00f3n de la c\u00e9lula hu\u00e9sped por inducci\u00f3n\u00a0de la prote\u00edna PI4Ka y angiostatina. Sin\u00a0embargo, de manera simult\u00e1nea, se identificaron prote\u00ednas\u00a0relacionadas con el arresto celular y apoptosis\u00a0como STAT1 y tioredoxin-reductasa. Previamente,\u00a0Hartman et al. reportaron que STAT1 en presencia\u00a0de interferon (IFN) promueve el arresto del ciclo celular\u00a0y la apoptosis. (16) Por su parte, Hinze et al. y\u00a0Ganther et al. sugieren que la tioredoxin-reductasa\u00a0participa como antioxidante, al reducir el proceso\u00a0viral. (17,18) Nuestros resultados muestran que a las 72h\u00a0del tratamiento con AAS, se sobreexpresan prote\u00ednas\u00a0como la ubiquitin-protein-ligasa E6A, adenilsuccinato\u00a0liasa y nibrina que podr\u00edan participar en la\u00a0inhibici\u00f3n de la replicaci\u00f3n del VHC. A este respecto,\u00a0Shirakura et al. mencionan que la ubiquitinprotein-\u00a0ligasa E6A participa en la degradaci\u00f3n de la\u00a0prote\u00edna de la c\u00e1pside del virus. (19) La adenil-succinato\u00a0liasa se requiere para la activaci\u00f3n de la v\u00eda antiviral\u00a0de la prote\u00edna 2\u2019,3\u2019di-dideoxiadenosina. Otra prote\u00edna\u00a0sobreexpresada fue la nibrina, de la cual se ha\u00a0reportado que posee actividad oncog\u00e9nica y un rol\u00a0en la reparaci\u00f3n de las roturas de doble hebra.<\/p>\n

Las prote\u00ednas identificadas podr\u00edan sugerir que\u00a0en las horas tempranas, luego de la infecci\u00f3n, el virus\u00a0promueve la desregulaci\u00f3n de la proliferaci\u00f3n y el ciclo\u00a0celular en su beneficio y que, despu\u00e9s del tratamiento\u00a0con AAS, la c\u00e9lula infectada comienza el proceso de\u00a0defensa. Deben realizarse m\u00e1s experimentos, a fin de\u00a0validar tanto los hallazgos del an\u00e1lisis prote\u00f3mico como\u00a0del an\u00e1lisis in silico para seguir esclareciendo el panorama\u00a0molecular de la infecci\u00f3n por VHC.<\/p>\n

CONCLUSI\u00d3N<\/strong><\/p>\n

La caracterizaci\u00f3n parcial de prote\u00ednas diferencialmente\u00a0expresadas, durante el tratamiento con AAS,\u00a0apunta hacia la identificaci\u00f3n de candidatos relacionados\u00a0a su actividad antiviral. El an\u00e1lisis prote\u00f3mico\u00a0efectuado provee informaci\u00f3n global de c\u00f3mo se\u00a0modifica el proteoma de las c\u00e9lulas Huh7 replic\u00f3n,\u00a0en respuesta a la exposici\u00f3n con AAS, as\u00ed como indicios\u00a0que contribuyen al entendimiento del mecanismo\u00a0de replicaci\u00f3n y patog\u00e9nesis del VHC.<\/p>\n

RESUMEN<\/strong><\/p>\n

El AAS disminuye la expresi\u00f3n del VHC por mecanismos\u00a0a\u00fan desconocidos. Se compararon perfiles de\u00a0expresi\u00f3n prote\u00f3mica en c\u00e9lulas de hepatocarcinoma\u00a0(Huh7) y c\u00e9lulas que expresan prote\u00ednas no estructuradas\u00a0del VHC (Huh7-VHC) tratadas con AAS\u00a04mM. Los perfiles obtenidos mediante electroforesis\u00a0bidimensional fueron analizados por pI y PM. Se\u00a0identificaron diferentes patrones entre c\u00e9lulas Huh7-\u00a0VHC tratadas y no tratadas con AAS. Entre las prote\u00ednas\u00a0diferencialmente expresadas encontramos prote\u00ednas\u00a0relacionadas con proliferaci\u00f3n celular\u00a0(MTMR6, FAM22, HDGF y HCF-1) y sobreexpresi\u00f3n\u00a0de angiotensina, PI4KA y STAT-1. A las 72h, identificamos sobreexpresi\u00f3n de adenil-succinato\u00a0sintasa, 2\u2019-3\u2019-di-deoxiadenosina, prote\u00edna ligasa de\u00a0ubiquitina E6A, adenilsuccinato-liasa y nibrina. El AAS\u00a0induce diferentes patrones proteicos en c\u00e9lulas Huh7-\u00a0VHC, promoviendo la activaci\u00f3n de prote\u00ednas relacionadas\u00a0con progresi\u00f3n celular, reparaci\u00f3n de DNA, inhibici\u00f3n\u00a0de apoptosis y estimulaci\u00f3n del crecimiento.<\/p>\n

Palabras clave: \u00c1cido acetilsalic\u00edlico (AAS), Virus de\u00a0la hepatitis C (VHC), Proteoma, Prote\u00f3mica, Electroforesis\u00a0bidimensional (2-DE).<\/p>\n

ABSTRACT<\/strong><\/p>\n

ASA has been shown to downregulate HCV expression;\u00a0however, the involved mechanisms are unknown.\u00a0We used proteomic analysis to compare protein\u00a0expression profiles between human\u00a0hepatocarcinome cells (Huh7) and Huh7-HCV cells\u00a0harboring expression of non-structural HCV proteins\u00a0to elucidate the mechanisms involved in ASAmediated\u00a0downregulation of HCV replication. Cell\u00a0lines were treated with 4 mM ASA and harvested to\u00a0isolate total proteins, which were resolved by 2-DE.\u00a0Gels were analyzed and proteins elucidated by pI\u00a0and MW patterns. Different protein patterns among\u00a0hepatocytes expressing HCV-proteins in ASA treated\u00a0and untreated cells were found. Among proteins differentially\u00a0expressed we found proteins related to\u00a0cellular proliferation (MTMR6, FAM22, HDGF y\u00a0HCF-1) and overexpression of angiotensin (PI4KA\u00a0y STAT-1). We found that ASA induces different\u00a0protein patterns in Huh7-HCV cells promoting activation\u00a0of proteins involved in cell progression, repair\u00a0of double strand breaks, proliferation, inhibition\u00a0of apoptosis and growth stimulation at the same\u00a0time that it decreased HCV expression.<\/p>\n

Key words: Acetylsalicylic acid (ASA), Hepatitis C\u00a0virus (HCV), Proteome, Proteomics, Bidimensional\u00a0electrophoresis (2-DE).<\/p>\n

AGRADECIMIENTOS<\/strong><\/p>\n

Los autores agradecen al Programa de Apoyo a la Investigaci\u00f3n\u00a0Cient\u00edfica y Tecnol\u00f3gica (Paicyt) SA1010-04 y Promep 103.5\/04\/2590, por el apoyo econ\u00f3mico\u00a0brindado.<\/p>\n

————————-<\/p>\n

El presente art\u00edculo est\u00e1 basado en la investigaci\u00f3n \u201cAn\u00e1lisis Prote\u00f3mico\u00a0e identificaci\u00f3n de prote\u00ednas y v\u00edas de se\u00f1alizaci\u00f3n inducidas por \u00e1cido\u00a0acetilsalic\u00edlico en c\u00e9lulas que espresan el virus de la hepatitis C\u201d,\u00a0galardonado con el Premio de Investigaci\u00f3n UANL 2014 en la categor\u00eda\u00a0de Ciencias de la Salud, otorgado en sesi\u00f3n solemne del Consejo\u00a0Universitario de la UANL, en agosto de 2014.<\/p>\n

* Universidad Aut\u00f3noma de Nuevo Le\u00f3n, Facultad de Medicina.
\n** Universidad de Guadalajara, Guadalajara.
\nContacto: amrivas@yahoo.ca<\/p>\n

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Recibido: 18\/07\/14
\nAceptado 18\/08\/14<\/p>\n","protected":false},"excerpt":{"rendered":"

ADRIANA S\u00c1NCHEZ GARC\u00cdA*, HERMINIA G. MART\u00cdNEZ RODR\u00cdGUEZ*, CLARA P. R\u00cdOS IBARRA*, ANA R. RINC\u00d3N S\u00c1NCHEZ**, ANA M. RIVAS ESTILLA* CIENCIA UANL \/ A\u00d1O 18, No. 71, ENERO-FEBRERO 2015 Art\u00edculo en PDF   La infecci\u00f3n cr\u00f3nica por el virus de\u00a0la hepatitis C (VHC) puede desencadenar\u00a0enfermedades hep\u00e1ticas\u00a0graves como cirrosis y carcinoma\u00a0hepatocelular; afecta a 3% de la poblaci\u00f3n\u00a0mundial y se considera un\u00a0problema grave […]<\/p>\n","protected":false},"author":2,"featured_media":3137,"comment_status":"closed","ping_status":"closed","sticky":false,"template":"","format":"standard","meta":{"_monsterinsights_skip_tracking":false,"_monsterinsights_sitenote_active":false,"_monsterinsights_sitenote_note":"","_monsterinsights_sitenote_category":0,"footnotes":""},"categories":[27],"tags":[],"class_list":["post-3135","post","type-post","status-publish","format-standard","has-post-thumbnail","hentry","category-investigacion"],"_links":{"self":[{"href":"https:\/\/cienciauanl.uanl.mx\/index.php?rest_route=\/wp\/v2\/posts\/3135","targetHints":{"allow":["GET"]}}],"collection":[{"href":"https:\/\/cienciauanl.uanl.mx\/index.php?rest_route=\/wp\/v2\/posts"}],"about":[{"href":"https:\/\/cienciauanl.uanl.mx\/index.php?rest_route=\/wp\/v2\/types\/post"}],"author":[{"embeddable":true,"href":"https:\/\/cienciauanl.uanl.mx\/index.php?rest_route=\/wp\/v2\/users\/2"}],"replies":[{"embeddable":true,"href":"https:\/\/cienciauanl.uanl.mx\/index.php?rest_route=%2Fwp%2Fv2%2Fcomments&post=3135"}],"version-history":[{"count":10,"href":"https:\/\/cienciauanl.uanl.mx\/index.php?rest_route=\/wp\/v2\/posts\/3135\/revisions"}],"predecessor-version":[{"id":3608,"href":"https:\/\/cienciauanl.uanl.mx\/index.php?rest_route=\/wp\/v2\/posts\/3135\/revisions\/3608"}],"wp:featuredmedia":[{"embeddable":true,"href":"https:\/\/cienciauanl.uanl.mx\/index.php?rest_route=\/wp\/v2\/media\/3137"}],"wp:attachment":[{"href":"https:\/\/cienciauanl.uanl.mx\/index.php?rest_route=%2Fwp%2Fv2%2Fmedia&parent=3135"}],"wp:term":[{"taxonomy":"category","embeddable":true,"href":"https:\/\/cienciauanl.uanl.mx\/index.php?rest_route=%2Fwp%2Fv2%2Fcategories&post=3135"},{"taxonomy":"post_tag","embeddable":true,"href":"https:\/\/cienciauanl.uanl.mx\/index.php?rest_route=%2Fwp%2Fv2%2Ftags&post=3135"}],"curies":[{"name":"wp","href":"https:\/\/api.w.org\/{rel}","templated":true}]}}