{"id":10575,"date":"2020-11-03T13:59:31","date_gmt":"2020-11-03T19:59:31","guid":{"rendered":"http:\/\/cienciauanl.uanl.mx\/?p=10575"},"modified":"2021-11-25T15:46:34","modified_gmt":"2021-11-25T21:46:34","slug":"aplicaciones-de-las-tecnicas-moleculares-en-inocuidad-alimentaria","status":"publish","type":"post","link":"https:\/\/cienciauanl.uanl.mx\/?p=10575","title":{"rendered":"APLICACIONES DE LAS T\u00c9CNICAS MOLECULARES EN INOCUIDAD ALIMENTARIA"},"content":{"rendered":"<p><a href=\"http:\/\/cienciauanl.uanl.mx\/wp-content\/uploads\/2020\/11\/artiom-vallat-Ik8cBHjutu4-unsplash-scaled.jpg\"><img loading=\"lazy\" decoding=\"async\" class=\"aligncenter wp-image-10576\" src=\"http:\/\/cienciauanl.uanl.mx\/wp-content\/uploads\/2020\/11\/artiom-vallat-Ik8cBHjutu4-unsplash-scaled.jpg\" alt=\"\" width=\"700\" height=\"467\" srcset=\"https:\/\/cienciauanl.uanl.mx\/wp-content\/uploads\/2020\/11\/artiom-vallat-Ik8cBHjutu4-unsplash-scaled.jpg 2560w, https:\/\/cienciauanl.uanl.mx\/wp-content\/uploads\/2020\/11\/artiom-vallat-Ik8cBHjutu4-unsplash-300x200.jpg 300w, https:\/\/cienciauanl.uanl.mx\/wp-content\/uploads\/2020\/11\/artiom-vallat-Ik8cBHjutu4-unsplash-1024x683.jpg 1024w, https:\/\/cienciauanl.uanl.mx\/wp-content\/uploads\/2020\/11\/artiom-vallat-Ik8cBHjutu4-unsplash-768x512.jpg 768w, https:\/\/cienciauanl.uanl.mx\/wp-content\/uploads\/2020\/11\/artiom-vallat-Ik8cBHjutu4-unsplash-1536x1024.jpg 1536w, https:\/\/cienciauanl.uanl.mx\/wp-content\/uploads\/2020\/11\/artiom-vallat-Ik8cBHjutu4-unsplash-2048x1365.jpg 2048w, https:\/\/cienciauanl.uanl.mx\/wp-content\/uploads\/2020\/11\/artiom-vallat-Ik8cBHjutu4-unsplash-220x146.jpg 220w\" sizes=\"auto, (max-width: 700px) 100vw, 700px\" \/><\/a><\/p>\n<div class=\"page\" title=\"Page 20\">\n<div class=\"section\">\n<div class=\"layoutArea\">\n<div class=\"column\">\n<p style=\"text-align: right;\">Yessica Enciso Mart\u00ednez*, Albani Itzigueri Rivera Ortega*<\/p>\n<div class=\"page\" title=\"Page 20\">\n<div class=\"section\">\n<div class=\"layoutArea\">\n<div class=\"column\">\n<p style=\"text-align: right;\">CIENCIA UANL \/ A\u00d1O 23, No.104, noviembre-diciembre 2020<\/p>\n<div class=\"page\" title=\"Page 20\">\n<div class=\"section\">\n<div class=\"layoutArea\">\n<div class=\"column\">\n<p>La inocuidad de los alimentos es la ausencia, o niveles seguros y aceptables, de peligro en los alimentos que pueden da\u00f1ar la salud de los consumidores. Los peligros transmitidos por los alimentos pueden ser de naturaleza microbiol\u00f3gica, qu\u00edmica o f\u00edsica. Y es fundamental mantener la inocuidad en cada etapa de la cadena alimentaria, desde la producci\u00f3n agr\u00edcola hasta el consumo (CDC, 2018). Seg\u00fan la Organizaci\u00f3n Mundial de la Salud, las enfermedades transmitidas por los alimentos constituyen una importante causa de morbilidad, mortalidad y un significativo impedimento al desarrollo socioecon\u00f3mico en todo el mundo (OMS, 2017).<\/p>\n<div class=\"page\" title=\"Page 20\">\n<div class=\"section\">\n<div class=\"layoutArea\">\n<div class=\"column\">\n<p>Los m\u00e9todos microbiol\u00f3gicos utilizados com\u00fanmente en la detecci\u00f3n de estos pat\u00f3genos tienen varias limitaciones, por ejemplo, requieren mucho tiempo, son laboriosos, carecen de especificidad y existe la falta de discriminaci\u00f3n entre cepas pat\u00f3genas y no pat\u00f3genas (Gui y Patel, 2011). La detecci\u00f3n y enumeraci\u00f3n de microorganismos en los alimentos son una parte esencial de cualquier control de calidad o plan de seguridad alimentaria (L\u00f3pez-Campos <em>et al<\/em>., 2012). Esta situaci\u00f3n ha conducido al desarrollo de nuevas tecnolog\u00edas para obtener resultados m\u00e1s precisos y r\u00e1pidos, como el uso de m\u00e9todos moleculares para caracterizaci\u00f3n microbiol\u00f3gica.<\/p>\n<div class=\"page\" title=\"Page 20\">\n<div class=\"section\">\n<div class=\"layoutArea\">\n<div class=\"column\">\n<p>Las t\u00e9cnicas moleculares sirven para comparar el orden de los \u00e1cidos nucleicos de dos o m\u00e1s microorganismos, es decir, las caracter\u00edsticas o polimorfismos gen\u00e9ticos. Esta composici\u00f3n permitir\u00e1 reconocer las caracter\u00edsticas espec\u00edficas de cada microorganismo, c\u00f3mo se relacionan y diferencian de otros. La hibridaci\u00f3n de una sonda espec\u00edfica, el an\u00e1lisis de ADNr y la reacci\u00f3n de cadena de polimerasa fueron las primeras t\u00e9cnicas moleculares utilizadas, y a trav\u00e9s del tiempo han sido perfeccionadas para ser m\u00e1s eficientes y accesibles (Angarita <em>et al<\/em>., 2017). Por lo cual, ha ido en aumento su uso para la caracterizaci\u00f3n de microorganismos pat\u00f3genos que representan un problema a nivel mundial.<\/p>\n<div class=\"page\" title=\"Page 21\">\n<div class=\"layoutArea\">\n<div class=\"column\">\n<h4>ENFERMEDADES TRANSMITIDAS POR ALIMENTOS: UN PROBLEMA A NIVEL MUNDIAL<\/h4>\n<div class=\"page\" title=\"Page 21\">\n<div class=\"layoutArea\">\n<div class=\"column\">\n<p>Las enfermedades transmitidas por alimentos son un problema global, son la causa de enfermedades y morbilidad, lo cual genera perjuicios a los consumidores, un gasto econ\u00f3mico para las familias y gobiernos y un impacto en la comercializaci\u00f3n globalizada de productos. Esto ha generado un costo de 95,200 millones de d\u00f3lares en p\u00e9rdidas totales de productividad al a\u00f1o y 15,000 millones de d\u00f3lares anuales en tratamiento de dichas enfermedades (Banco Mundial, 2018). En 2015, los alimentos contaminados ocasionaron 600 millones de casos a nivel mundial y 420,000 muertes (OMS, 2019). En M\u00e9xico, en 2017, se presentaron 8,285 casos de intoxicaci\u00f3n alimentaria bacteriana (Secretar\u00eda de Salud, 2017).<\/p>\n<p>Se han identificado m\u00e1s de 250 enfermedades transmitidas por alimentos, la mayor\u00eda de ellas son infecciones producidas por una variedad de bacterias, virus o par\u00e1sitos que penetran en el organismo a trav\u00e9s del agua o los alimentos y pueden ser de car\u00e1cter infeccioso o t\u00f3xico. Entre los principales agentes causales de este tipo de enfermedades se encuentran <em>Campylobacter<\/em> spp., <em>E. coli<\/em> y <em>Salmonella<\/em> ent\u00e9rica no tifoidea (OMS, 2015). En M\u00e9xico, las principales enfermedades transmitidas por alimentos son la salmonelosis, la fiebre tifoidea y las intoxicaciones alimentarias por bacterias (Secretar\u00eda de Salud, 2017).<\/p>\n<div class=\"page\" title=\"Page 21\">\n<div class=\"layoutArea\">\n<div class=\"column\">\n<p>Las enfermedades transmitidas por alimentos son un problema de salud p\u00fablica en todo el mundo. La incidencia ha ido en aumento debido a la globalizaci\u00f3n, los cambios de h\u00e1bitos alimenticios, surgimiento de nuevas formas de transmisi\u00f3n, el aumento de la resistencia de los pat\u00f3genos a los antimicrobianos y la heterogeneidad dentro de una misma especie (Sousa y Pereira, 2013). Las poblaciones m\u00e1s vulnerables son ni\u00f1os, mujeres embarazadas, ancianos y personas de escasos recursos, adem\u00e1s se generan p\u00e9rdidas econ\u00f3micas y grandes costos a los servicios de salud (Forero <em>et al<\/em>., 2017). Por esto es importante la identificaci\u00f3n de cepas causantes de brotes infecciosos, detectar la transmisi\u00f3n cruzada de pat\u00f3genos, determinar la fuente de infecci\u00f3n y reconocer cepas particularmente virulentas de cada especie (Rodr\u00edguez <em>et al<\/em>., 2009).<\/p>\n<p><a href=\"http:\/\/cienciauanl.uanl.mx\/wp-content\/uploads\/2020\/11\/michael-schiffer-13UugSL9q7A-unsplash-scaled.jpg\"><img loading=\"lazy\" decoding=\"async\" class=\"aligncenter wp-image-10577\" src=\"http:\/\/cienciauanl.uanl.mx\/wp-content\/uploads\/2020\/11\/michael-schiffer-13UugSL9q7A-unsplash-scaled.jpg\" alt=\"\" width=\"700\" height=\"467\" srcset=\"https:\/\/cienciauanl.uanl.mx\/wp-content\/uploads\/2020\/11\/michael-schiffer-13UugSL9q7A-unsplash-scaled.jpg 2560w, https:\/\/cienciauanl.uanl.mx\/wp-content\/uploads\/2020\/11\/michael-schiffer-13UugSL9q7A-unsplash-300x200.jpg 300w, https:\/\/cienciauanl.uanl.mx\/wp-content\/uploads\/2020\/11\/michael-schiffer-13UugSL9q7A-unsplash-1024x683.jpg 1024w, https:\/\/cienciauanl.uanl.mx\/wp-content\/uploads\/2020\/11\/michael-schiffer-13UugSL9q7A-unsplash-768x512.jpg 768w, https:\/\/cienciauanl.uanl.mx\/wp-content\/uploads\/2020\/11\/michael-schiffer-13UugSL9q7A-unsplash-1536x1024.jpg 1536w, https:\/\/cienciauanl.uanl.mx\/wp-content\/uploads\/2020\/11\/michael-schiffer-13UugSL9q7A-unsplash-2048x1365.jpg 2048w, https:\/\/cienciauanl.uanl.mx\/wp-content\/uploads\/2020\/11\/michael-schiffer-13UugSL9q7A-unsplash-220x146.jpg 220w\" sizes=\"auto, (max-width: 700px) 100vw, 700px\" \/><\/a><\/p>\n<\/div>\n<\/div>\n<\/div>\n<\/div>\n<\/div>\n<\/div>\n<\/div>\n<\/div>\n<\/div>\n<div class=\"page\" title=\"Page 22\">\n<div class=\"section\">\n<div class=\"layoutArea\">\n<div class=\"column\">\n<h4>DESVENTAJAS DE LAS T\u00c9CNICAS CONVENCIONALES PARA LA DETECCI\u00d3N DE PAT\u00d3GENOS<\/h4>\n<div class=\"page\" title=\"Page 22\">\n<div class=\"section\">\n<div class=\"layoutArea\">\n<div class=\"column\">\n<p>Los m\u00e9todos de diagn\u00f3stico convencionales se basan en la capacidad de crecimiento de los microorganismos en condiciones artificiales. En general, las muestras implican el cultivo en medios de preenriquecimiento y enriquecimiento, o placas de agar selectivas, para detectar o aislar especies microbianas espec\u00edficas, y se complementan con pruebas bioqu\u00edmicas, morfol\u00f3gicas o serol\u00f3gicas para su confirmaci\u00f3n (Dinesh y Ambarish, 2009; Mandal <em>et al<\/em>., 2011). Estos m\u00e9todos son muy sensibles, f\u00e1cilmente adaptables, econ\u00f3micos y se puede obtener informaci\u00f3n cualitativa y cuantitativa sobre las poblaciones microbianas presentes en la muestra (Sousa y Pereira, 2013). Sin embargo, las muestras provienen de cultivos mixtos de microorganismos que pueden incluir varias especies pat\u00f3genas, pero tambi\u00e9n flora normal. En la mayor\u00eda de los casos se deben realizar procedimientos de aislamiento para obtener cultivos puros y los resultados se obtienen en 1-3 d\u00edas y hasta 7-10 d\u00edas para la confirmaci\u00f3n (Dinesh y Ambarish, 2009; Mandal <em>et al<\/em>., 2011). Por lo tanto, se requiere mucha mano de obra y mucho tiempo para la identificaci\u00f3n de microorganismos.<\/p>\n<div class=\"page\" title=\"Page 22\">\n<div class=\"section\">\n<div class=\"layoutArea\">\n<div class=\"column\">\n<p>El an\u00e1lisis microbiol\u00f3gico de los alimentos sigue siendo una tarea dif\u00edcil para pr\u00e1cticamente todos los ensayos y tecnolog\u00edas, especialmente para las especies pat\u00f3genas particulares. Los problemas pueden deberse a la complejidad de las matrices y composici\u00f3n de los alimentos, la distribuci\u00f3n heterog\u00e9nea de bajos niveles de pat\u00f3genos, el estr\u00e9s sufrido por los microorganismos durante el procesamiento de los alimentos, la presencia de bacterias de la microbiota normal, especialmente en alimentos crudos, y las poblaciones microbianas pueden abarcar c\u00e9lulas senescentes o latentes que son viables pero no cultivables, debido al procesamiento al que se sujeta el alimento, lo que imposibilita el uso de los m\u00e9todos de cultivo como herramienta de diagn\u00f3stico (L\u00f3pez <em>et al<\/em>., 2012; Palomino y Gonz\u00e1lez, 2014). Por lo que el uso de m\u00e9todos moleculares puede ayudar a contrarrestar estos inconvenientes, esto representa alternativas r\u00e1pidas y sensibles para la detecci\u00f3n de microorganismos.<\/p>\n<p><a href=\"http:\/\/cienciauanl.uanl.mx\/wp-content\/uploads\/2020\/11\/changyoung-koh-qMMkVrF9B2w-unsplash-scaled.jpg\"><img loading=\"lazy\" decoding=\"async\" class=\"aligncenter wp-image-10578\" src=\"http:\/\/cienciauanl.uanl.mx\/wp-content\/uploads\/2020\/11\/changyoung-koh-qMMkVrF9B2w-unsplash-scaled.jpg\" alt=\"\" width=\"700\" height=\"467\" srcset=\"https:\/\/cienciauanl.uanl.mx\/wp-content\/uploads\/2020\/11\/changyoung-koh-qMMkVrF9B2w-unsplash-scaled.jpg 2560w, https:\/\/cienciauanl.uanl.mx\/wp-content\/uploads\/2020\/11\/changyoung-koh-qMMkVrF9B2w-unsplash-300x200.jpg 300w, https:\/\/cienciauanl.uanl.mx\/wp-content\/uploads\/2020\/11\/changyoung-koh-qMMkVrF9B2w-unsplash-1024x683.jpg 1024w, https:\/\/cienciauanl.uanl.mx\/wp-content\/uploads\/2020\/11\/changyoung-koh-qMMkVrF9B2w-unsplash-768x512.jpg 768w, https:\/\/cienciauanl.uanl.mx\/wp-content\/uploads\/2020\/11\/changyoung-koh-qMMkVrF9B2w-unsplash-1536x1024.jpg 1536w, https:\/\/cienciauanl.uanl.mx\/wp-content\/uploads\/2020\/11\/changyoung-koh-qMMkVrF9B2w-unsplash-2048x1365.jpg 2048w, https:\/\/cienciauanl.uanl.mx\/wp-content\/uploads\/2020\/11\/changyoung-koh-qMMkVrF9B2w-unsplash-220x146.jpg 220w\" sizes=\"auto, (max-width: 700px) 100vw, 700px\" \/><\/a><\/p>\n<\/div>\n<\/div>\n<\/div>\n<\/div>\n<div class=\"page\" title=\"Page 23\">\n<div class=\"layoutArea\">\n<div class=\"column\">\n<h4>M\u00c9TODOS MOLECULARES UTILIZADOS EN LA IDENTIFICACI\u00d3N DE PAT\u00d3GENOS TRANSMITIDOS POR ALIMENTOS<\/h4>\n<div class=\"page\" title=\"Page 23\">\n<div class=\"layoutArea\">\n<div class=\"column\">\n<p>En la actualidad, los m\u00e9todos moleculares para la identificaci\u00f3n de microorganismos pat\u00f3genos en alimentos son muy importantes debido a que presentan gran especificidad, sensibilidad, rapidez y, adem\u00e1s, pueden ser automatizadas. El uso de m\u00e9todos moleculares ha permitido la identificaci\u00f3n de nuevos microorganismos presentes en los alimentos, as\u00ed como el estudio de poblaciones microbianas sin aislamiento previo y la detecci\u00f3n de microorganismos altamente pat\u00f3genos. Las t\u00e9cnicas moleculares son de gran utilidad para el reconocimiento de brotes originados por alimentos contaminados con pat\u00f3genos, las cuales permiten la identificaci\u00f3n de las probables fuentes de contaminaci\u00f3n, hasta llegar a su reservorio y las v\u00edas de transmisi\u00f3n (Boric, 2008).<\/p>\n<p>Los primeros m\u00e9todos de identificaci\u00f3n molecular fueron la hibridaci\u00f3n con una sonda espec\u00edfica, el an\u00e1lisis de secuencias del ADNr 16S, la hibridaci\u00f3n ADN-ADN y el an\u00e1lisis del polimorfismo de longitud de fragmentos de restricci\u00f3n. La identificaci\u00f3n por medio de t\u00e9cnicas moleculares se basa en la composici\u00f3n constitutiva de los \u00e1cidos nucleicos. Cabe mencionar que hay otras t\u00e9cnicas que han demostrado buenos resultados en la detecci\u00f3n e identificaci\u00f3n de microorganismos pat\u00f3genos en los alimentos, como la reacci\u00f3n en cadena de la polimerasa (PCR), biosensores, electroforesis en gel en campo pulsado (PFGE), microarreglos, la pirosecuenciaci\u00f3n 454, entre otros (Palomino y Gonz\u00e1lez, 2014). Cada vez es m\u00e1s f\u00e1cil la utilizaci\u00f3n de este tipo de t\u00e9cnicas, algunas adem\u00e1s de ser utilizadas en el laboratorio tambi\u00e9n pueden usarse en sitios de observaci\u00f3n, lo cual les da una gran ventaja frente a las t\u00e9cnicas convencionales para la identificaci\u00f3n de los microorganismos pat\u00f3genos en los alimentos.<\/p>\n<p><a href=\"http:\/\/cienciauanl.uanl.mx\/wp-content\/uploads\/2020\/11\/mari-potter-ts2Ki0LPXFk-unsplash-scaled.jpg\"><img loading=\"lazy\" decoding=\"async\" class=\"aligncenter wp-image-10579\" src=\"http:\/\/cienciauanl.uanl.mx\/wp-content\/uploads\/2020\/11\/mari-potter-ts2Ki0LPXFk-unsplash-scaled.jpg\" alt=\"\" width=\"700\" height=\"466\" srcset=\"https:\/\/cienciauanl.uanl.mx\/wp-content\/uploads\/2020\/11\/mari-potter-ts2Ki0LPXFk-unsplash-scaled.jpg 2560w, https:\/\/cienciauanl.uanl.mx\/wp-content\/uploads\/2020\/11\/mari-potter-ts2Ki0LPXFk-unsplash-300x200.jpg 300w, https:\/\/cienciauanl.uanl.mx\/wp-content\/uploads\/2020\/11\/mari-potter-ts2Ki0LPXFk-unsplash-1024x683.jpg 1024w, https:\/\/cienciauanl.uanl.mx\/wp-content\/uploads\/2020\/11\/mari-potter-ts2Ki0LPXFk-unsplash-768x512.jpg 768w, https:\/\/cienciauanl.uanl.mx\/wp-content\/uploads\/2020\/11\/mari-potter-ts2Ki0LPXFk-unsplash-1536x1024.jpg 1536w, https:\/\/cienciauanl.uanl.mx\/wp-content\/uploads\/2020\/11\/mari-potter-ts2Ki0LPXFk-unsplash-2048x1365.jpg 2048w, https:\/\/cienciauanl.uanl.mx\/wp-content\/uploads\/2020\/11\/mari-potter-ts2Ki0LPXFk-unsplash-220x146.jpg 220w\" sizes=\"auto, (max-width: 700px) 100vw, 700px\" \/><\/a><\/p>\n<\/div>\n<\/div>\n<\/div>\n<\/div>\n<\/div>\n<\/div>\n<\/div>\n<\/div>\n<\/div>\n<\/div>\n<\/div>\n<\/div>\n<\/div>\n<\/div>\n<\/div>\n<\/div>\n<\/div>\n<\/div>\n<\/div>\n<\/div>\n<\/div>\n<\/div>\n<\/div>\n<\/div>\n<\/div>\n<\/div>\n<\/div>\n<\/div>\n<\/div>\n<\/div>\n<\/div>\n<\/div>\n<\/div>\n<\/div>\n<div class=\"page\" title=\"Page 24\">\n<div class=\"section\">\n<div class=\"layoutArea\">\n<div class=\"column\">\n<h4>APLICACIONES DE LAS T\u00c9CNICAS MOLECULARES EN INOCUIDAD ALIMENTARIA<\/h4>\n<div class=\"page\" title=\"Page 24\">\n<div class=\"section\">\n<div class=\"layoutArea\">\n<div class=\"column\">\n<h4>Reacci\u00f3n en cadena de la polimerasa (PCR)<\/h4>\n<div class=\"page\" title=\"Page 24\">\n<div class=\"section\">\n<div class=\"layoutArea\">\n<div class=\"column\">\n<p>En el diagn\u00f3stico molecular microbiol\u00f3gico es utilizada para el recuento de pat\u00f3genos transmitidos por alimentos. La reacci\u00f3n en cadena de la polimerasa es una t\u00e9cnica en la cual, a partir de una copia de ADN a amplificar, se obtienen millones de copias, lo cual permite su detecci\u00f3n; actuando varias prote\u00ednas necesarias para la s\u00edntesis de nuevas hebras de ADN. Es una t\u00e9cnica f\u00e1cil y r\u00e1pida de utilizar, se requieren de 2 a 3 horas para llevarla a cabo. Existen varios tipos de PCR que son utilizados en la identificaci\u00f3n de microorganismos pat\u00f3genos en alimentos entre los que se encuentran PCR-est\u00e1ndar, PCR-anidada, PCR-<em>in situ<\/em>, PCR-ensayo de inmunoabsorci\u00f3n ligado a enzimas (PCR-ELISA), PCR-transcripci\u00f3n reversa (PCR-RT), entre otras (Mas, 2016).<\/p>\n<div class=\"page\" title=\"Page 24\">\n<div class=\"section\">\n<div class=\"layoutArea\">\n<div class=\"column\">\n<p>La PCR anidada comprende dos rondas de amplificaci\u00f3n con diferentes pares de <em>primers<\/em> en cada una. Primero se realiza una reacci\u00f3n con los <em>primers<\/em> externos para amplificar una regi\u00f3n de DNA m\u00e1s extenso, que contiene el segmento diana. Posteriormente, con este producto de amplificaci\u00f3n, se ejecuta una segunda PCR con los internos para amplificar la regi\u00f3n espec\u00edfica. La especificidad aumenta porque los <em>primers<\/em> s\u00f3lo hibridar\u00e1n en un sitio dentro de la mol\u00e9cula y el resultado ser\u00e1 una \u00fanica banda (Camacho, 2017). La PCR <em>in situ<\/em> consiste en una reacci\u00f3n de PCR en secciones de c\u00e9lulas, donde los productos pueden visualizarse en el sitio de amplificaci\u00f3n y se realiza sobre preparaciones fijas en un portaobjetos. En la t\u00e9cnica se efect\u00faa una primera amplificaci\u00f3n de ADN blanco y una detecci\u00f3n mediante hibridaci\u00f3n <em>in situ<\/em> convencional con sondas de ADN\/ARN (Mart\u00ednez y Silva, 2004). La PCR-RT se utiliza para estudiar la expresi\u00f3n de ciertos genes de inter\u00e9s realizando la amplificaci\u00f3n partiendo del ARN. PCR-ELISA implica la incorporaci\u00f3n de nucle\u00f3tidos marcados qu\u00edmicamente en el amplic\u00f3n de PCR y posteriormente la detecci\u00f3n del producto de PCR con el complejo de anticuerpo-enzima que reconoce el marcador qu\u00edmico presente en los nucle\u00f3tidos incorporados (Hong <em>et al.<\/em>, 2003).<\/p>\n<div class=\"page\" title=\"Page 24\">\n<div class=\"section\">\n<div class=\"layoutArea\">\n<div class=\"column\">\n<p>Existen pruebas comerciales de PCR para pat\u00f3genos relacionados a alimentos (<em>Salmonella, Listeria monocytogenes, E. coli<\/em> O157:H7, <em>Campylobacter<\/em>, entre otros). Se han utilizado pruebas basadas en la PCR en tiempo real para la identificaci\u00f3n de <em>E. coli<\/em> en alimentos como hamburguesas y brochetas de carne, la t\u00e9cnica se llev\u00f3 a cabo en un promedio de 24 horas. A su vez, tambi\u00e9n la PCR-RT se ha utilizado en carnes y productos c\u00e1rnicos para la detecci\u00f3n de <em>Salmonella<\/em> spp. Asimismo, se han utilizado pruebas de PCR para la identificaci\u00f3n de <em>Listeria monocytogenes<\/em> en leche y productos l\u00e1cteos (Gouws y Liedemann, 2005). Kasturi y Drgon (2017) analizaron 1741 muestras de diferentes empresas dedicadas al procesamiento de alimentos, en las cuales lograron detectar, con PCR-RT, 55% m\u00e1s positivos de <em>Salmonella<\/em> spp. que utilizando el ensayo de enzimoinmunoan\u00e1lisis (VIDAS-Vitek\u00ae). Tambi\u00e9n se ha utilizado PCR-RT en conjunto con un pretratamiento para la detecci\u00f3n de c\u00e9lulas viables, pero no cultivables de <em>E. coli<\/em> O157:H7 en agua embotellada y lograron excluir el efecto de las c\u00e9lulas muertas (Cao <em>et al.<\/em>, 2019). La t\u00e9cnica de PCR m\u00faltiple permite la detecci\u00f3n simult\u00e1nea de varios agentes pat\u00f3genos en un alimento, por ejemplo, se utiliz\u00f3 este tipo de t\u00e9cnica en muestras de alimentos permitiendo la identificaci\u00f3n de 11 especies bacterianas distintas y <em>Helicobacter pylori<\/em> (Kawasaki <em>et al.<\/em>, 2005). Esta t\u00e9cnica permite una identificaci\u00f3n m\u00e1s r\u00e1pida y espec\u00edfica de los pat\u00f3genos asociados a los alimentos.<\/p>\n<div class=\"page\" title=\"Page 24\">\n<div class=\"section\">\n<div class=\"layoutArea\">\n<div class=\"column\">\n<h4>Biosensores<\/h4>\n<div class=\"page\" title=\"Page 24\">\n<div class=\"section\">\n<div class=\"layoutArea\">\n<div class=\"column\">\n<p>Los biosensores est\u00e1n recubiertos con una capa de reconocimiento bacterial que puede ser un anticuerpo, ADN, enzima o combinaciones entre ellos. Los cuales se unen a los microorganismos de la muestra analizada, esto ocasiona modificaciones electroqu\u00edmicas que pueden medirse como una se\u00f1al. Su intensidad es directamente proporcional a los niveles de pat\u00f3genos (Hakovirta <em>et al<\/em>., 2008). Los biosensores han sido aplicados en la detecci\u00f3n de pat\u00f3genos presentes en alimentos debido a que pueden detectar varios tipos de bacterias pat\u00f3genas. Se ha desarrollado un biosensor para la detecci\u00f3n de pat\u00f3genos en carne (<em>Campylobacter, E. coli<\/em> y <em>Salmonella<\/em>), el cual permite realizar pruebas de control r\u00e1pidas y sensibles en la planta de procesamiento de dichos productos (Kawasaki <em>et al<\/em>., 2005). Li <em>et al.<\/em> (2012) propusieron una estrategia r\u00e1pida y sensible para la detecci\u00f3n de <em>Salmonella<\/em> integrando la extracci\u00f3n simple de ADN y PCR con un sensor de ADN electroqu\u00edmico basado en el gen <em>inv<\/em>A, se logr\u00f3 detectar S. Typhimurium en un rango de 10 a 105 UFC\/mL sin necesidad de preenriquecimiento. En 2018, Hashemi y Forouzandeh dise\u00f1aron un nuevo biosensor que puede detectar directamente el ADN de las bacterias, este m\u00e9todo no requiere amplificaci\u00f3n, tiene alta sensibilidad y es un sistema r\u00e1pido en comparaci\u00f3n con los m\u00e9todos convencionales (4 h). Los biosensores pueden basarse en ADN, enzimas, anticuerpos y receptores, los cuales les permiten la detecci\u00f3n de pat\u00f3genos como <em>Bacillus cereus, Campylobacter, E. coli,<\/em> <em>Salmonella<\/em> <em>Typhimurium<\/em>, entre otros. Ha demostrado ser un m\u00e9todo eficiente y r\u00e1pido en la identificaci\u00f3n de pat\u00f3genos.<\/p>\n<p><a href=\"http:\/\/cienciauanl.uanl.mx\/wp-content\/uploads\/2020\/11\/donald-giannatti-sWZ85aMZXg4-unsplash-scaled.jpg\"><img loading=\"lazy\" decoding=\"async\" class=\"aligncenter wp-image-10580\" src=\"http:\/\/cienciauanl.uanl.mx\/wp-content\/uploads\/2020\/11\/donald-giannatti-sWZ85aMZXg4-unsplash-scaled.jpg\" alt=\"\" width=\"500\" height=\"667\" srcset=\"https:\/\/cienciauanl.uanl.mx\/wp-content\/uploads\/2020\/11\/donald-giannatti-sWZ85aMZXg4-unsplash-scaled.jpg 1920w, https:\/\/cienciauanl.uanl.mx\/wp-content\/uploads\/2020\/11\/donald-giannatti-sWZ85aMZXg4-unsplash-225x300.jpg 225w, https:\/\/cienciauanl.uanl.mx\/wp-content\/uploads\/2020\/11\/donald-giannatti-sWZ85aMZXg4-unsplash-768x1024.jpg 768w, https:\/\/cienciauanl.uanl.mx\/wp-content\/uploads\/2020\/11\/donald-giannatti-sWZ85aMZXg4-unsplash-1152x1536.jpg 1152w, https:\/\/cienciauanl.uanl.mx\/wp-content\/uploads\/2020\/11\/donald-giannatti-sWZ85aMZXg4-unsplash-1536x2048.jpg 1536w\" sizes=\"auto, (max-width: 500px) 100vw, 500px\" \/><\/a><\/p>\n<\/div>\n<\/div>\n<\/div>\n<\/div>\n<\/div>\n<\/div>\n<\/div>\n<\/div>\n<\/div>\n<\/div>\n<\/div>\n<\/div>\n<\/div>\n<\/div>\n<\/div>\n<\/div>\n<\/div>\n<\/div>\n<\/div>\n<\/div>\n<\/div>\n<\/div>\n<\/div>\n<\/div>\n<\/div>\n<\/div>\n<\/div>\n<\/div>\n<div class=\"page\" title=\"Page 25\">\n<div class=\"layoutArea\">\n<div class=\"column\">\n<h4>Microarreglos<\/h4>\n<div class=\"page\" title=\"Page 25\">\n<div class=\"layoutArea\">\n<div class=\"column\">\n<p>Los microarreglos son un conjunto de sondas moleculares (oligonucle\u00f3tidos sint\u00e9ticos, clones de ADN o productos de PCR) fijadas sobre un soporte s\u00f3lido (portaobjetos, Gene-chip o chips microelectr\u00f3nicos). Se purifica el \u00e1cido nucleico, posteriormente se realiza su marcado (radioactivo o fluorescente), se procede a su hibridaci\u00f3n y lavados, se realiza la medici\u00f3n de la se\u00f1al utilizando un esc\u00e1ner (Dom\u00e9nech y Vila, 2014). Varios microarreglos se han desarrollado para los pat\u00f3genos implicados en brotes transmitidos por alimentos. Se han utilizado microarreglos para la detecci\u00f3n y caracterizaci\u00f3n de bacterias pat\u00f3genas como <em>Yersinia, Campylobacter<\/em> y <em>Salmonella<\/em> en carne de cerdo (Palomino <em>et al.<\/em>, 2014). En otras investigaciones se han utilizado para identificar 23 pat\u00f3genos presentes en alimentos, siendo una gran ventaja de este m\u00e9todo que permite amplificar el ADN de diferentes microorganismos en una s\u00f3lo muestra (Wang <em>et al.<\/em>, 2008). En un ensayo de microarreglos se distingui\u00f3 a <em>Yersinia pestis<\/em> y <em>Bacillus anthracis<\/em> de otras especies bacterianas probadas experimentalmente y se identificaron correctamente las sondas de oligonucle\u00f3tidos espec\u00edficas de Y. <em>pestis<\/em> usando ADN extra\u00eddo de muestras de leche inoculadas. Los resultados sugieren que puede ser una herramienta de diagn\u00f3stico potencialmente \u00fatil para detectar y confirmar la presencia de bacterias en los alimentos (Goji <em>et al<\/em>., 2012).<\/p>\n<div class=\"page\" title=\"Page 25\">\n<div class=\"layoutArea\">\n<div class=\"column\">\n<h4>Electroforesis en gel de campo pulsado<\/h4>\n<div class=\"page\" title=\"Page 25\">\n<div class=\"layoutArea\">\n<div class=\"column\">\n<p>La electroforesis en gel de campo pulsado (PFGE) se ha utilizado para la caracterizaci\u00f3n de <em>Campylobacter jejuni, Listeria monocytogenes, Salmonella,<\/em> <em>Shigella, E. coli<\/em> O157:H7, <em>Vibrio cholerae<\/em>, entre otros pat\u00f3genos transmitidos por alimentos. En la actualidad, la PFGE es considerada como el est\u00e1ndar de oro para la producci\u00f3n de huellas dactilares de ADN para un aislado bacteriano. Este m\u00e9todo consiste en la separaci\u00f3n de mol\u00e9culas grandes de ADN alternando la direcci\u00f3n de la corriente el\u00e9ctrica de una manera pulsada. Se han desarrollado protocolos de PFGE espec\u00edficos para cierto tipo de bacterias, por ejemplo, en el <em>PulseNet<\/em> se pueden encontrar protocolos de bacterias pat\u00f3genas transmitidas por alimentos (<em>Campylobacter jejuni, Vibrio cholerae, E. coli<\/em> O157,<em> Salmonella<\/em>, entre otras). <em>PulseNet<\/em> es una red nacional de Estados Unidos que conecta los casos de enfermedades transmitidas por alimentos para detectar brotes, utilizando PFGE como una herramienta para la detecci\u00f3n de las bacterias pat\u00f3genas (CDC, 2019). Este m\u00e9todo es \u00fatil en investigaciones de brotes trasmitidos por alimentos. Se ha realizado la tipificaci\u00f3n por medio de PFGE de cepas de <em>Campylobacter<\/em> aisladas de alimentos de origen animal (cerdo, aves de corral, pavo, ovejas y corderos) relacionadas con brotes originados por el consumo de este tipo de alimentos (Silva <em>et al<\/em>., 2016; Lahti <em>et al<\/em>., 2017).<\/p>\n<div class=\"page\" title=\"Page 25\">\n<div class=\"layoutArea\">\n<div class=\"column\">\n<h4>CONCLUSIONES<\/h4>\n<div class=\"page\" title=\"Page 25\">\n<div class=\"layoutArea\">\n<div class=\"column\">\n<p>Las t\u00e9cnicas moleculares presentan mayor ventaja frente a las t\u00e9cnicas convencionales de cultivo para la detecci\u00f3n e identificaci\u00f3n de microorganismos pat\u00f3genos presentes en alimentos, son m\u00e1s espec\u00edficos, sensibles y se realizan en menor tiempo. Por lo cual han ido en aumento en los \u00faltimos a\u00f1os, permitiendo una mejor detecci\u00f3n e identificaci\u00f3n de los microorganismos pat\u00f3genos en alimentos. Se ha incrementado el uso y diversificaci\u00f3n de m\u00e9todos moleculares en microbiolog\u00eda de los alimentos, permitiendo escoger cu\u00e1l es el mejor en la identificaci\u00f3n de un pat\u00f3geno en particular. Por lo cual, se propone la estandarizaci\u00f3n y validaci\u00f3n de los m\u00e9todos moleculares utilizados para la identificaci\u00f3n de microorganismos pat\u00f3genos en alimentos debido a que existen pocas investigaciones respecto a ello.<\/p>\n<\/div>\n<div class=\"page\" title=\"Page 20\">\n<div class=\"section\">\n<div class=\"layoutArea\">\n<div class=\"column\">\n<p>&nbsp;<\/p>\n<p style=\"text-align: right;\">* Centro de Investigaci\u00f3n en Alimentaci\u00f3n y Desarrollo, A.C.<br \/>\nContacto: yessica.enciso.mc18@ estudiantes.ciad.mx<\/p>\n<p>&nbsp;<\/p>\n<\/div>\n<\/div>\n<\/div>\n<\/div>\n<div class=\"column\">\n<div class=\"page\" title=\"Page 26\">\n<div class=\"layoutArea\">\n<div class=\"column\">\n<h4>REFERENCIAS<\/h4>\n<div class=\"page\" title=\"Page 26\">\n<div class=\"layoutArea\">\n<div class=\"column\">\n<p>Angarita, M., Torres, M.I., y D\u00edaz, A.K. (2017). T\u00e9cnicas de Biolog\u00eda Molecular en el desarrollo de la investigaci\u00f3n. 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